當(dāng)拿到ELISA試劑盒，在開始做實(shí)驗(yàn)之前，正確的加樣可以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。在ELISA常規(guī)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)涉及加樣標(biāo)準(zhǔn)品/樣本、加酶結(jié)合物、加底物和終止反應(yīng)等。在進(jìn)行ELISA試劑盒加樣怎樣確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性？

  正確加樣步驟

  在加樣中，一般使用的是微量加樣器（移液器,移液器）。按照試劑盒說明書，將規(guī)定量的液體加入酶標(biāo)板。在每次加入新液體組分前，需要更換新的吸頭，以免液體組分發(fā)生交叉污染。也可以用一次性的定量塑料管加樣。

  部分加樣步驟需要需要使用稀釋后液體組分，如標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉形式），需要先用一定量的稀釋液（通常是試劑盒提供的復(fù)溶液或指定的緩沖液）復(fù)溶，使其溶解成一定濃度的儲(chǔ)備液。然后再將這個(gè)儲(chǔ)備液按照一定的倍比進(jìn)行稀釋，配制成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的上樣（即加到酶標(biāo)板的孔中）。

  需要將濃縮的抗體和酶結(jié)合物用合適的稀釋液稀釋成1×工作液（即可以直接使用的濃度），才能加到酶標(biāo)板的孔中。

  加抗體、酶結(jié)合物工作液和底物工作液時(shí)，可用定量多道加液器，節(jié)省加樣時(shí)間和操作，更好的確?？着c孔之間平行，減少因操作帶來的誤差。

  在進(jìn)行ELISA試劑盒加樣中，一般需要進(jìn)行"45"加樣。即加樣槍的吸頭所在的直線應(yīng)當(dāng)與板條所在的直線呈45度角，吸頭貼著孔壁加入。

  在吸取樣品時(shí)，槍頭不應(yīng)黏附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，導(dǎo)致加樣準(zhǔn)確性降低。

  吸頭所在的直線與板條所在直線所呈角度不要過小，過小會(huì)使殘留的液體殘留才酶標(biāo)板孔內(nèi)，導(dǎo)致加樣準(zhǔn)確性降低。

  不要將吸頭深入孔底，深入孔底可能會(huì)壓彎吸頭，另一方面吸頭深入孔底會(huì)產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致加樣準(zhǔn)確性降低。

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