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減少ELISA實驗誤差8大妙招,你知多少?

發(fā)布時間:2024-10-12     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  在ELISA實驗過程,我們實驗過程經(jīng)常會出現(xiàn)一些誤差,例如操作誤差、樣本試劑誤差、儀器誤差等。為了實驗更順利進(jìn)行,我們需要了解酶聯(lián)免疫吸附實驗常見的誤差。今天,通蔚生物為大家詳細(xì)介紹下在ELISA實驗中常見的誤差。

elisa


  1、留意試劑盒保質(zhì)期。買回來的試劑盒除了正確的保存之外,要留意試劑盒的保質(zhì)期,過期的試劑盒請誤用于實驗。


  2、咨詢閱讀說明書。在進(jìn)行ELISA實驗前,請詳細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書規(guī)范進(jìn)行規(guī)范化操作。對于不同批號的試劑盒不可混用,對于值得改進(jìn)的地方要反復(fù)實驗確定成立后才能改進(jìn)。


  3、評估試劑實用及穩(wěn)定性。試劑的穩(wěn)定性和實用性保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性至關(guān)重要!在試劑啟用之前,務(wù)必進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,如試劑符合要求,方可使用。


  4、使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器應(yīng)該定期校準(zhǔn),頻率取決于使用頻率、環(huán)境條件和實驗室的質(zhì)量要求。一般建議至少一年校準(zhǔn)一次,如果使用頻繁或?qū)纫筝^高,則需要更頻繁地校準(zhǔn),例如每三個月或半年一次。如果移液器曾經(jīng)跌落、損壞或暴露在極端環(huán)境下,則需要重新校準(zhǔn)。


  5、加樣準(zhǔn)確,快速。加樣或多或少,對酶生成物的量不能確定,直接會影響顯色的結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)!因此,加樣要慎重!這里要求大家在加樣盡量做到在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。


  6、洗滌液要新鮮,洗滌要徹底。不新鮮的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。這里要求大家在使用洗滌液現(xiàn)用現(xiàn)配的原則;在洗滌過程要徹底,否則酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。


  7、嚴(yán)格的控制反應(yīng)時間。 反應(yīng)時間過長,酶容易失活;反應(yīng)時間過段,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。


  8、嚴(yán)格的掌握顯色時間。認(rèn)真閱讀試劑盒說明書,每個ELISA試劑盒都有其推薦的顯色時間范圍,通常在5-30分鐘之間。顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性;如果超過顯色時間,如操作誤差(如孵育溫度過高)、試劑污染等也可能導(dǎo)致非特異性顯色,這些情況也可能造成顏色過深。


  上述為大家介紹ELISA實驗過程如何避免誤差,細(xì)節(jié)決定成??!從細(xì)微的實驗中觀察,實驗和總結(jié),避免因誤差導(dǎo)致實驗反復(fù)!也希望上述內(nèi)容對您的實驗有所幫助,如果您還有更好的減小實驗誤差妙招請多交流!

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