亚洲av成人精品网站在线播放_欧美超级乱婬视频播放_性色av无码一区二区三区人妻_欧洲少妇性喷潮_伊人久久综合精品无码av专区

歡迎來到上海通蔚!
請登錄 注冊 購物車

021-54845833/15800441009

品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

首頁>>公司新聞>>抗體:選擇二抗技巧

公司新聞

相關新聞

抗體:選擇二抗技巧

發(fā)布時間:2024-12-09     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  在生物實驗中,使用二抗通過與一抗結合,進而實現(xiàn)對目標抗原的間接檢測。二抗通常是帶有標簽,以方面檢測和純化。在實驗中,選擇合適的二抗提供高信號、低背景和對您的科學問題的清晰洞察。下文將為您詳細介紹一下二抗的選擇技巧。


  二抗選擇


  在實驗中選擇合適的二抗取決于多種因素,以確保高度靈敏和準確檢測目標抗原。這些因素包括靶標特異性、克隆性、宿主物種、抗體形式、結合物類型和交叉吸附抗體等等。接下來我們一一為您介紹。


  1.靶標特異性


  二抗必須針對一抗的宿主物種產(chǎn)生。例如,如果一抗是在小鼠中產(chǎn)生的,則二抗必須是抗小鼠的,并且在小鼠以外的宿主物種中產(chǎn)生(例如,山羊抗小鼠二抗)。此外,二抗應該對一抗類或亞類具有特異性。由于大多數(shù)多克隆一抗是針對同種型IgG產(chǎn)生的,因此使用的二抗應該識別IgG重鏈和輕鏈(抗IgGH+L)。另一方面,單克隆一抗是針對特定IgG亞類產(chǎn)生的,因此需要亞類特異性二抗來檢測它們。


  2.克隆性


  傳統(tǒng)上,抗體被分為多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆二抗是識別同一抗原上不同表位的異質(zhì)抗體群,而單克隆二抗是識別抗原上相同表位的同質(zhì)抗體群。在決定抗體克隆性時,選擇取決于預期應用的更重要因素——特異性或靈敏度。雖然單克隆二抗比多克隆抗體具有更好的特異性,并且是需要高度特異性靶標檢測的應用的首選(例如,用于檢測特定的小鼠同種型),但多克隆二抗比單克隆二抗靈敏得多,因此用于需要高靈敏度的應用(例如,用于檢測低豐度靶標)。


  3.宿主物種


  宿主物種是指生產(chǎn)二抗的動物。確保二抗宿主與生產(chǎn)一抗的宿主動物不同非常重要。雖然大多數(shù)一抗是在兔子或老鼠體內(nèi)生產(chǎn)的,但山羊是市售二抗最廣泛使用的宿主動物。


  在進行多重實驗時,雖然建議所有一抗均來自同一宿主物種,但使用的二抗應在同一宿主物種中產(chǎn)生。這有助于防 止二抗與非目標物種的一抗之間發(fā)生交叉反應。


  4.抗體形式


  二抗有多種形式,包括完整抗體和抗體片段。二抗形式的選擇取決于抗體的預期應用。例如,對于組織樣本中的IHCIF,包括F(ab')2Fab'的抗體片段比完整抗體更受歡迎,因為它們的尺寸更小,可以更好地穿透組織。此外,由于片段二抗缺乏Fc區(qū),它們有助于消除Fc區(qū)與某些細胞類型(B細胞、NK細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞)上的Fc受體非特異性結合導致的高背景,從而使它們非常適合用于富含Fc受體的樣本。然而,需要記住的一點是,片段抗體的靈敏度低于完整抗體,因為它們的尺寸較小,可以結合更少的染料或酶分子。

二抗

  5.結合物類型


  二抗結合物的選擇主要取決于兩個因素:二抗的應用,以及該應用中使用的檢測方法。例如,在進行蛋白質(zhì)印跡實驗時,雖然HRP標記的二抗用于化學發(fā)光檢測,但建議使用熒光染料標記的二抗進行熒光檢測。下表根據(jù)預期應用和檢測方法重點介紹了建議的二抗結合物。


應用 二抗偶聯(lián)
蛋白質(zhì)印跡法
酶標記二抗,例如用于化學發(fā)光檢測的 HRP 和用于比色檢測的 AP
熒光標記的二抗可用于熒光檢測

免疫組織化學
用于顯色IHC的酶標記二抗(例如HRP或HRP聚合物)
用于信號放大的生物素化二抗
用于熒光IHC的熒光標記二抗

免疫熒光
熒光標記的二抗
HRP標記的二抗可用于基于TSA的檢測
流式細胞術
熒光標記的二抗
酶標記的二抗
生物素化的二抗可與熒光標記的鏈霉親和素一起使用

酶聯(lián)免疫吸附試驗
生物素標記的二抗
酶標記的二抗



  6.交叉吸附抗體


  交叉吸附二抗是傳統(tǒng)的多克隆二抗,經(jīng)過額外的純化步驟以消除與非目標物種的非預期IgG的交叉反應。當二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白結合或在多路復用應用中與脫靶抗體結合時,交叉反應可能導致高背景或非特異性信號。交叉吸附通過將親和純化的多克隆二抗通過含有固定化抗體或其他物種血清蛋白的柱子來幫助提高抗體特異性。這有助于捕獲柱子中的非特異性抗體,同時允許在流過液中收集沒有交叉反應的抗體。


  最后,上述是通蔚為各位盤點選擇二抗的一些技巧,希望對大家在實驗中選擇合適的二抗,提高實驗的特異性。

人妻与老人中文字幕| 亚洲欧美日韩成人高清在线一区| 中文字幕精品一区二区2021年| 亚洲午夜国产精品无码| 无码人妻人妻经典| 成人免费无码大片a毛片| 国产国拍精品av在线观看按摩| 国产婷婷色一区二区三区在线| 日韩在线观看精品亚洲| 欧美激情精品久久久久久| 色8激情欧美成人久久综合电影| 在线免费播放av观看| 日本体内she精高潮| 日出水了特别黄的视频| 欧洲卡一卡二卡三爱区| 亚洲 欧美 变态 另类 综合 | 亚洲av无码一区东京热不卡| 新狼窝色av性久久久久久| 亚洲精品字幕在线观看| 亚洲人成自拍网站在线观看| 国产乱人伦在线播放| 国产精品久久久av久久久| 小鲜肉自慰网站| 国产精品爽爽ⅴa在线观看| 亚洲欧洲日本无在线码| 色又黄又爽18禁免费视频| 熟妇人妻va精品中文字幕| 少妇被躁爽到高潮无码久久| 在线精品视频一区二区三区| 影音先锋2020色资源网| 国产又黄又爽胸又大免费视频| 丰满人妻一区二区三区高清精品| 精品无码免费专区毛片| 日本免费高清一本视频| 狠狠五月激情六月丁香| 国产亚洲av片在线观看18女人| 午夜性色一区二区三区不卡视频| 亚洲成av人在线观看天堂无码 | 中文无码一区二区不卡αv| 国产成人AVXXXXX在线观看| 中文字幕亚洲综合久久|