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ELISA技術支持

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酶聯免疫吸附實驗:ELISA 樣本處理

發(fā)布時間:2024-08-16     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  在ELISA中,記錄對于跟蹤驗證步驟和確保整個過程的一致性至關重要。正確標記樣品和試劑對于避免混淆至關重要。使用經過校準的移液器進行精確測量有助于最大限度地減少ELISA測定中常見的變異性和移液錯誤。優(yōu)化試劑濃度并遵守方案可提高測定性能和可重復性。例如,保持適當的孵育時間和室溫條件對于獲得可靠的結果是必要的。

  適當的樣本制備非常重要,因為它會影響ELISA測試的準確性和可靠性。此過程包括減少干擾、保持樣本完整以及為測試創(chuàng)造最佳條件的步驟。為了安全起見,根據材料的傳染性程度,需要不同級別的防護?;镜姆雷o服有助于防止樣本污染和錯誤結果。必備的安全裝備包括實驗室工作服、手套、護目鏡,有時還包括通風櫥。

樣品的存儲:

1.避免污染:遵循制造商的指導來存儲樣品。

2.標簽和密封: 確保樣品正確標記和密封,以防止干燥或蒸發(fā)。

3.及時分析:盡快分析樣本以獲得準確的結果。

樣品采集:

1.遵守規(guī)則: 遵守樣本采集的法律準則。

2.告知客戶: 讓客戶知道需要多少樣品。

3.反映狀況:確保結果準確反映收到的樣本的狀況。

樣品制備:

1.遵循說明:遵循測試套件的說明來混合和提取分析物。

2.使用適當的設備: 確保所有設備合適且維護良好。

3.時間:分析前準備樣品或按指示儲存。

使用冷凍樣品:

1.解凍: 根據分析物的穩(wěn)定性,在 4°C 或室溫下完全解凍樣品。

2.混合:徹底混合液體樣品,不要產生泡沫。

3.避免反復冷凍: 將樣品分裝于-20°C 下保存,以避免多次凍融循環(huán)并保持樣品質量。

  資源優(yōu)化

  為了提高效率,有效管理分析板、洗滌緩沖液和試劑等資源至關重要。使用可靠的洗板機并遵守洗滌步驟的規(guī)程可以顯著減少背景信號并提高靈敏度。定期進行數據分析可確保分析性能符合預期標準,尤其是在處理低分析物濃度時。

細胞培養(yǎng)上清液

1.離心: 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋轉培養(yǎng)基 10 分鐘。

2.儲存: 分裝并將上清液儲存于 -80°C。避免反復凍融。

細胞提取物

1.準備:將組織培養(yǎng)板放在冰上,并用冰冷的 PBS 清洗細胞。

2.提取:每 100 毫米平板添加 0.5 毫升提取緩沖液,刮下細胞,收集在冷卻的試管中,短暫渦旋,并在冰上孵育 15-30 分鐘。

3.離心: 4°C 下以 13,000 rpm 旋轉 10 分鐘。

4.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

條件培養(yǎng)基:

1.培養(yǎng)細胞:使用含血清的培養(yǎng)基直至細胞達到所需的匯合度。

2.準備培養(yǎng)基: 用溫熱的 PBS 清洗,添加無血清培養(yǎng)基,孵育 1-2 天。

3.離心: 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋轉培養(yǎng)基 10 分鐘。

4.儲存:分裝并將上清液儲存于 -80°C。避免反復凍融。

牛奶、尿液、唾液:

1.離心: 4°C 下以 10,000 xg 旋轉 2 分鐘。

2.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

等離子體:

1.收集血液: 使用抗凝管,在 4°C 下以 3,000 rpm 離心 10 分鐘。

2.儲存:分裝上清液(血漿)并儲存在 -80°C 下。避免反復凍融。

血清:

1.收集血液:使用未經處理的試管,在室溫下孵育 20 分鐘。

2.離心: 4°C 下以 3,000 rpm 旋轉 10 分鐘。

3.儲存:分裝上清液(血清)并儲存在 -80°C 下。避免反復凍融。

組織提取物:

1.解剖組織: 在冰上操作,在液氮中快速冷凍。

2.提?。?/span> ~5 mg 組織添加~300 μL 提取緩沖液,均質化,然后沖洗刀片。

3.攪拌:在 4°C 下混合 2 小時,然后在 4°C 下以 13,000 rpm 離心 20 分鐘。

4.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

一般建議:

1.蛋白質濃度: 目標濃度為1-2 mg/mL。

2.稀釋: 用結合緩沖液將血清、血漿、細胞和組織提取物稀釋 50%。

3.離心解凍樣品:使用前在 4°C 下以 10,000 rpm 旋轉 5 分鐘。

  試劑制備和質量控制:正確的試劑制備和驗證是實現可靠檢測性能的關鍵。一致的試劑標簽和控制以及跟蹤使用和存儲有助于提高ELISA程序的整體可靠性。實施嚴格的質量控制可確保準確測量分析物濃度并確保結果可重復。t使用前在4°C下以10,000rpm轉速旋轉5分鐘。

存儲期限限制:

2-8°C:適合最多5天。

-20°C:適合長達6個月。

-80°C:可保存長達 2

液氮:適合通過適當的方法無限期保存。

避免反復凍融循環(huán):

1.將樣品分成更小的等份以減少多次凍融循環(huán)的需要。

2.15-25°C水浴中快速解凍樣品并立即使用。

3.如果要重新冷凍,請在解凍后立即進行,以盡量減少樣品的降解。

套件的存儲:

1.儲存于 2-8°C 干燥處;避免冷凍組件。

2.遵守標簽上的有效期。

3.防止試劑盒凍結以避免損壞和無效結果。

先進先出:

1.優(yōu)先使用有效期最短的套件。

2.請注意工具盒上的首次使用日期,以防止混淆。

預熱:

1.使用前將所有試劑恢復至室溫(20-25°C)。

2.使用后應立即將組件放回儲存條件。

未使用組件的存儲:

1.將未使用的微量滴定板存放在裝有干燥劑的可重新密封的袋中。

2.將所有組件直立并安全關閉地存放。

  樣品處理

  在Elisa樣本處理中,離心用于去除細胞成分和碎片,這對于獲得干凈的上清液非常重要。
  通過深度或膜過濾方法去除殘留顆粒,進一步清潔樣品。此步驟可確保樣品不含任何可能影響測試結果的污染物。
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