ELISA 加樣操作要點(diǎn)
精準(zhǔn)的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA試劑結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢？ELISA實(shí)驗(yàn)中一般有5次加樣，即加標(biāo)本、加檢測(cè)抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。小科將ELISA加樣操作要點(diǎn)進(jìn)行歸納，供參考。
實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì)導(dǎo)致最后讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來(lái)誤差。
加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡。
加樣時(shí)避免液體濺出，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄。
如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實(shí)驗(yàn)。
每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。

ELISA 洗板操作要點(diǎn)

ELISA試劑實(shí)驗(yàn)通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此，不嚴(yán)格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)操作最多一個(gè)步驟，如何洗板呢？
通蔚生物ELISA試劑洗液需要20倍稀釋，配置時(shí)用新鮮無(wú)污染的蒸餾水或去離子水現(xiàn)配現(xiàn)用。洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。
垂直倒液，迅速、干脆，重復(fù)2-3次，不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來(lái)倒液體。
倒液后將酶標(biāo)板放在吸水紙拍干。用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因?yàn)榧?xì)小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會(huì)相差很大。
每孔加300uL洗液，太多將溢出孔外污染相鄰的孔。特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度孔流串到低濃度孔或空白孔，其造成的交叉污染將無(wú)法洗掉，背景增高。
加入洗液浸泡30s。洗板時(shí)間太短，洗滌效果不佳。延長(zhǎng)洗板時(shí)間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。