ELISA試劑盒常見問題處理

出現(xiàn)問題

出現(xiàn)問題的原因

解決辦法

曲           線

OD值不正常

試劑盒未回溫

試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好

控制正確溫度

孵育時間不準(zhǔn)確

控制孵育時間

洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加

洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干

陽光直射，對著風(fēng)直接吹

避風(fēng)避光

酶標(biāo)儀的波長錯誤

酶標(biāo)儀的波長450nm

抗體的稀釋錯誤

正確的稀釋抗體

水質(zhì)問題

用娃哈哈礦泉水代替

白   板

洗滌液配制錯誤

正確的配制洗滌液

少加液體（抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液）

正確的步驟加液體

錯加液體

無 梯 度

標(biāo)準(zhǔn)品也污染

換標(biāo)準(zhǔn)品點板

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

線 性 不 好

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

回  收  率

空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本

換陰性樣本做回收率

空白管在實驗中被污染

實驗中防止交叉污染

水質(zhì)原因

用娃哈哈礦泉水代替

偏  高

添加量不準(zhǔn)確

精準(zhǔn)的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量多

準(zhǔn)確的取液吹干

取到其它相層液體

取需用相吹干

復(fù)溶液未稀釋或加入量少

正確的稀釋復(fù)溶液

偏  低

添加量不準(zhǔn)確

精準(zhǔn)的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量少

準(zhǔn)確的取液吹干

復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多

正確的稀釋復(fù)溶液

假陰、陽性

水質(zhì)原因

點復(fù)溶液驗證

用娃哈哈礦泉水代替

實驗操作原因

吸取到其它相吹干

準(zhǔn)確的取液吹干

離心不徹底

延長離心時間

樣本的污染

更換樣本

乳化未處理完全

溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象

儀器試劑原因

離心管未清洗干凈

正確的洗滌器具

有機溶劑的影響

做試劑空白看影響結(jié)果

衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質(zhì)）

更換衍生化試劑

與曲線好壞相關(guān)

保證曲線的正常

金標(biāo)檢測（T）線顏色較淺

尿液pH偏堿性

用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。

尿樣滴加過多

重新測定，尿樣按照說明書，控制在2滴

尿液過于混濁

將尿液離心后，取上清液重新測定

金標(biāo)質(zhì)控（C）線不出現(xiàn)

檢測卡由于高溫、受潮等原因失效

尿樣需要重新檢測。

過了有效期失效。

該批號的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理，尿液需要重新檢測

操作過程中檢測卡沒有平放，導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測區(qū)

尿樣需要重新檢測，且檢測卡平放于桌面上再加樣。

尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等）

該尿液的檢測結(jié)果無效

金標(biāo)卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

金標(biāo)卡上的劃痕；膠體金在跑板過程中沒有完全跑干凈而遺留在卡上的痕跡；

該檢測卡結(jié)果不可信，尿液需要重新檢測。

實驗重復(fù)性不好

操作人員的不一致，取樣的不一致，樣本數(shù)量的多少，加樣時間的長短，洗滌條件不一致，加樣量不一致

盡量保持的實驗一致性

分析軟件的使用

不能設(shè)置和保存

正確的設(shè)置和保存

如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果