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  • T4 DNA連接酶

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中文名稱(chēng) : T4 DNA連接酶 


英文名稱(chēng) : T4 DNA Ligase 


C A S : 9015-85-4


分子量 : 55.3kDa,單體


級(jí) 別 : BR


分子量 : 55.3kDa,單體


來(lái) 源 : 含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌


濃 度 : 1u/ul(200CEU/ul)


濃 度 : 5Weiss u/ul(1000CEU/ul)


濃 度 : 30Weiss u/ul(6000CEU/ul)


活性定義 : 是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位:20ul反應(yīng)體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量) 


酶活性分析混合物 : 66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]


保存液組分 : 20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT,0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油


10×T4 DNA Ligase緩沖液(#B69) : 400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)


抑制劑 : 當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過(guò)200 mM時(shí),可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性


失 活 : 65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘


注 意 : T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存;轉(zhuǎn)化時(shí),連接產(chǎn)物的體積不得超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%;電轉(zhuǎn)化之前,先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物


質(zhì)量控制 : 測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測(cè):粘性末端或平末端DNA的連接能力


性 狀 : 液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP


用 途 : 生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接;雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接;雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù);連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè);位點(diǎn)特異性突變;擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性


保 存 :  -20°C


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